Techniki izolacji dla płytki ze smugami

Mimo, że nie można ich zobaczyć gołym okiem, bakterie są wszędzie. Istnieją w żywności, glebie, wodzie, powierzchniach w naszych domach oraz w i na naszych ciałach. Bakterie generalnie istnieją w mieszanych populacjach. Izolacja określonej bakterii od innych gatunków bakterii w danej próbce pozwala mikrobiologom na badanie jej struktury i funkcji, cech wykorzystywanych do jej identyfikacji. Mikrobiolodzy często izolują bakterie przy użyciu jednej z kilku technik płytek smugowych.

Narzędzia

Pętla inokulacyjna jest używana do przenoszenia mikroorganizmów. Składa się ona z drutu nichromowego lub platynowego z małą, okrągłą pętlą na jednym końcu. Drugi koniec jest prosty i wsuwa się w uchwyt. Dostępne są również plastikowe, jednorazowe pętle inokulacyjne. Bakterie mogą być izolowane tylko wtedy, gdy rosną. Mikrobiolodzy hodują bakterie do izolacji na płytkach Petriego w płytkich, okrągłych szalkach Petriego wypełnionych stałym podłożem zwanym agarem. Agar imituje środowisko, w którym bakterie rosną w sposób naturalny. Płytki wypełnione pożywką są sterylne i zamykane pokrywką, aby zapobiec wzrostowi niepożądanych organizmów. Podczas izolacji na płytkach paciorkowcowych, pętla inokulacyjna jest wielokrotnie sterylizowana w płomieniu palnika Bunsena.

• Pętla inokulacyjna jest używana do przenoszenia mikroorganizmów.
  
• Naczynia wypełnione pożywką są sterylne i zamykane pokrywką, aby zapobiec wzrostowi niepożądanych organizmów.

Zasada

Technika płytek smugowych jest najbardziej popularną metodą izolacji specyficznych bakterii z próbki zawierającej mieszaninę mikroorganizmów. Technika ta zasadniczo rozcieńcza liczbę organizmów i zmniejsza ich gęstość. Pozwala to mikrobiologom na rozróżnienie i wyizolowanie poszczególnych kolonii bakterii. Kolonia jest widocznym skupiskiem bakterii. Wszystkie bakterie w pojedynczej kolonii pochodzą z tej samej komórki bakteryjnej. W związku z tym, pojedyncze kolonie są "czystymi" koloniami. Czysta kolonia jest przenoszona na inną płytkę w celu uzyskania czystej kultury składającej się z jednego typu bakterii.

• Technika płytek smugowych jest najbardziej popularną metodą izolacji specyficznych bakterii z próbki zawierającej mieszaninę mikroorganizmów.
  
• Czysta kolonia jest przenoszona na inną płytkę w celu uzyskania czystej kultury składającej się z jednego typu bakterii.

Procedura

Właściwie przeprowadzona izolacja za pomocą płytek smugowych rozrzedza próbkę i umożliwia pojedynczym komórkom bakteryjnym rozwinięcie się w izolowane kolonie. Mikrobiolog rozpoczyna od wysterylizowania pętli inokulacyjnej w płomieniu. Schładza pętlę dotykając nią agaru, następnie zanurza pętlę w próbce i rozprowadza ją tam i z powrotem, aby pokryć fragment płytki. Sterylizuje pętlę, chłodzi ją i zaszczepia drugą, przyległą część płytki, przeciągając pętlę przez pierwszą część kilka razy i pokrywając drugą część ruchem zygzakowatym. Powoduje to pobranie niewielkiej liczby bakterii z pierwszej sekcji i przeniesienie ich do drugiej sekcji. Liczba powtórzeń tej podstawowej procedury zależy od zastosowanej metody płytek smugowych. Niezależnie od metody, oryginalna próbka jest używana do inokulacji tylko pierwszej sekcji płytki.

• Właściwie przeprowadzona izolacja na płytkach smugowych rozrzedza próbkę i umożliwia poszczególnym komórkom bakteryjnym rozwinięcie się w izolowane kolonie.
  
• Chłodzi pętlę dotykając jej do agaru, następnie zanurza pętlę w próbce i rozprowadza ją tam i z powrotem, aby pokryć fragment płytki.

Metody

Metody płytek smugowych różnią się liczbą odcinków agaru. W metodzie T-streak wykorzystuje się trzy sekcje: górną połowę i dwie dolne sekcje o równej wielkości. Początkowe inokulum jest umieszczane w górnej połowie płytki. Bakterie są przenoszone z górnej sekcji do jednej z dolnych sekcji, a następnie z tej dolnej sekcji do drugiej. W metodzie kwadrantowej, cztery równej wielkości sekcje są posiewane. Metoda ciągłego posiewu obejmuje zwykle inokulację górnej połowy płytki, obrócenie jej o 180 stopni i inokulację drugiej połowy płytki bez sterylizacji pętli lub przeciągania bakterii z poprzedniej sekcji.

• Metody płytek z posiewem różnią się liczbą posiewanych sekcji agaru.
  
• Metoda ciągłego posiewu polega zazwyczaj na zaszczepieniu górnej połowy płytki, obróceniu jej o 180 stopni i zaszczepieniu drugiej połowy płytki bez sterylizacji pętli lub przeciągania bakterii z poprzedniej sekcji.